2.2
Odběr vzorku
Obvykle se odebírá krev venózní, a to z loketní žíly. Stažení paže při venózním odběru by mělo být co nejkratší a zaškrcení se má povolit po odběru první zkumavky. Je třeba se vyhnout tzv. „cvičení“ paží; vede k anaerobnímu metabolismu ve stažené paži s následnou lokální acidózou, vzestupem koncentrace laktátu a draslíku a aktivity CK.
Při nasávání krve je zapotřebí se vyhnout přílišnému podtlaku, který může vést k mechanické hemolýze. Dnes se většinou krev odebírá pomocí bezpečnostního vakuového systému, kde je podtlak dán stupněm vakua v odběrové nádobce.
Odebírá-li se krev ze zavedené jehly nebo katétru, kterými kape infúze nebo je podáván lék, nastávají největší chyby, když není odpuštěn dostatek krve před jejím shromážděním v odběrové nádobce. Zásadně by se tedy měla užít k odběru jiná žíla.
U odběru kapilární krve dáváme pozor na možnost hemolýzy při delším styku krve s dezinfekčním prostředkem a „vymačkávání“ krve z prstu, které vede k naředění tkáňovým mokem.
Při odběru tepenné nebo arterializované krve na vyšetření krevních plynů je nutné pracovat anaerobně, tj. kapka nesmí stékat po prstu a v kapiláře nebo stříkačce nesmějí být bubliny. Příklad ovlivnění výsledku při nedodržení zásad anaerobního odběru ukazuje následující tabulka.
Vliv preanalytických faktorů na výsledky vyšetření krevních plynů a acidobazické rovnováhy; ↑ = výsledek zvýšen, ↓ = výsledek snížen. BE = base excess, SO2 = saturace hemoglobinu kyslíkem
Parametr
Správný odběr
Odběr krve s bublinami
Správný odběr
Skladování vzorku v teple
pH
7,27
7,34 ↑
7,40
7,25 ↓
pCO2 (kPa)
5,1
3,7 ↓
5,3
7,2 ↑
pO2 (kPa)
10,4
16,1 ↑
12,1
6,5 ↓
HCO3- (mmol/l)
16,9
14,7
24,1
22,5 ↓
BE (mmol/l)
-8,7
-9,9
-0,1
-4,5 ↓
SO2 (relat. díly)
0,96
0,99 ↑
0,97
0,89 ↓
2.2.1
Odběrová nádobka
Vždy by měla platit zásada čistou zkumavku označit v přítomnosti pacienta (nikoliv předem) a ještě před vlastním odběrem jméno pacienta znovu zkontrolovat; tím se podstatně omezí možnost záměny.
Většina vyšetření se provádí ze séra; krev se musí nechat dostatečnou dobu srazit. Odstředí-li se příliš brzy, kdy ještě nedošlo ke sražení krve, obvykle dojde k hemolýze. Navíc se v oddělené plazmě dodatečně sráží fibrin a vzniká gel; hrozí ucpání jehly, nasátí menšího objemu analyzátorem a chybný výsledek.
Nejvhodnější jsou odběrové nádobky z plastické hmoty, opatřené iniciátorem koagulace. Oddělení séra (plazmy) velmi usnadní speciální inertní separační gel, jehož hustota je volena tak, aby po odstředění vytvořil rozhraní mezi krvinkami a vrstvou séra.
2.2.2
Vyšetření z nesrážlivé krve a z krevní plazmy
Pro některá klinicko-biochemická vyšetření je nutné získat nesrážlivou krev. Jsou to vyšetření prováděná z celé krve (acidobazická rovnováha, glykémie, minerály v režimu POCT), z erytrocytů (glykovaný hemoglobin) nebo z plazmy (koagulační faktory).
První zásadou je dodržet předepsaný poměr mezi množstvím antikoagulantu a objemem přidané krve. Je nutné také zjistit, který protisrážlivý prostředek je vhodné použít na požadovaný test. Krev musíme v nádobce dokonale promíchat, a to opakovaným obracením uzavřené nádobky.
K běžně užívaným antikoagulačním přípravkům patří (v závorce jsou uvedeny příklady metod, pro které je uvedený prostředek vhodný):
  • citrát sodný (koagulační testy, sedimentace erytrocytů);
  • soli kyseliny etylendiaminotetraoctové, např. K3EDTA, Na2EDTA (glykovaný hemoglobin, amoniak, krevní obraz, hladiny imunosupresiv, mnohé imunochemické metody využívající značený antigen či protilátku);
  • heparin (acidobazická rovnováha; pro současné stanovení iontů v plné krvi se užívá heparin ve formě lithné soli nasycený vápníkem).
Zatímco citrát a soli EDTA (kyselina etylendiaminotetraoctová) brání koagulaci tím, že vážou ionty Ca2+, heparin působí jako kofaktor antitrombinu.
Někdy přidáváme ke krvi protisrážlivý prostředek (obvykle heparin) z jiných příčin. Umožní totiž okamžité odstředění krve bez nutnosti čekat na její dokonalé sražení. Plazma se doporučuje i u nemocných s předpokládanou poruchou koagulace, kde by postupné srážení krve mohlo vést k opožděné tvorbě fibrinu a problémům s nasáváním séra jehlou analyzátoru.
Má-li nemocný extrémně zvýšený počet trombocytů, během koagulace se z nich uvolní kalium, a proto má sérum falešně vyšší koncentraci draslíku ve srovnání s plazmou, kde k rozpadu trombocytů nedošlo. Podobně se může kalium uvolnit z leukocytů, jsou-li výrazně zmnoženy, např. u nemocných s chronickou lymfatickou leukémií.
2.2.3
Změněné optické vlastnosti séra/plazmy
Krevní sérum i plazma (prostým okem je nelze rozlišit) jsou čiré, světle žluté kapaliny. Může se však stát, že obsahují vysokou koncentraci bilirubinu (žluté ikterické zbarvení), triacylglycerolů (zkalené chylózní sérum/plazma) nebo obsahují volný hemoglobin (různý stupeň červeného zbarvení při hemolýze). Dnes místo subjektivního hodnocení vzhledu séra/plazmy užíváme objektivní vyjádření stupně iktericity-chylozity-hemolýzy pomocí tzv. sérových indexů. Krevní sérum/plazma se ředí ve vhodném poměru a měřením absorbance při sadě vlnových délek je přístroj schopen vyjádřit přítomnost výše uvedených přísad kvantitativně. Automaticky se pak k výsledku dodává komentář nebo při vysokém stupni ovlivnění není výsledek vůbec vydán. Vzhled séra normálního a změněného ukazuje obrázek; o vlivu hemolýzy bude podrobněji pojednáno v posledních odstavcích kapitoly.
+
Vzhled séra normálního, hemolytického, ikterického a chylózního
Zdroj: Autor J. Ženková, Vzhled séra normálního, hemolytického, ikterického a chylózního, licence Creative Commons BY-SA 4.0.
Vzhled séra normálního, hemolytického, ikterického a chylózního