6.3
Postup stanovení glukózy
Stanovení můžeme provádět:
  1. bez deproteinace (sérum, plazma)
  1. s deproteinací (krev, nesrážlivá krev, hemolytické sérum nebo plazma)
Pro stanovení s deproteinací připravíme deproteinační roztok – roztok kyseliny trichloroctové o koncentraci 50 g/l.
Poznámka
V praxi se už deproteinace neužívá. Měří se v plazmě nebo v séru bez deproteinace, při užití plné krve se užívá elektrochemická detekce (enzymová elektroda s glukózooxidázou).
Vlastní stanovení s použitím soupravy BioLaTest GLUCOSE, GLU 500, Erba Lachema
Princip metody:
Glukóza se oxiduje kyslíkem za katalytického působení glukózooxidázy na peroxid vodíku a glukonát. Peroxid vodíku reaguje v přítomnosti peroxidázy s fenolem a 4-aminoantipyrinem za vzniku chinoniminového barviva. Intenzita vzniklého růžového zabarvení je úměrná koncentraci glukózy ve vzorku.
+
64. Princip stanovení glukózy
Obr. 64. Princip stanovení glukózy
Složení činidel:
  1. R1 činidlo 2 x 250 ml,
    Fosfátový pufr (pH 7,15) 250 mmol/l
    Fenol 5 mmol/l
    4-aminoantipyrin 0,5 mmol/l
    Glukózaoxidáza > 417 μkat/l
    Peroxidáza > 33 μkat/l
  1. R2 činidlo - standard 2 x 5 ml
    koncentrace viz štítek na lahvičce
Pomocná činidla:
Kalibrátor (není součástí soupravy). Ke kalibraci se doporučuje Lyonorm Calibrator, kat. č. BLT00069
Postup analýzy:
Vlnová délka (490 – 550) nm s maximem při 500 nm, kyveta 1 cm, teplota 37 °C
Vzorky: moč, sérum, plazma (heparin, EDTA), (separace erytrocytů do 30 minut)
Odměřit [ml]
Vzorek
Standard
Reagenční blank
Sérum
0,010
---
---
Kalibrátor
---
0,010
---
Destilovaná voda
---
---
0,010
Činidlo R1
1,000
1,000
1,000
Promíchá se a inkubuje se 5 – 10 minut při 37 °C. Poté se změří absorbance vzorku (Avz) a standardu (Ast) proti reagenčnímu blanku. Zbarvení je stabilní 1 hodinu.
Analýza moče:
Moč se zředí destilovanou vodou v poměru 1 + 10. Výsledek se násobí 11x. Ke kalibraci a kontrole se doporučuje Solunorm Glukosa, kat. č. 10003179.
Výpočet:
Glukóza [mmol/l] =  AvzAst⋅cst , kde cst = koncentrace glukózy v kalibrátoru.
Poznámka
  • Linearita: do 25 mmol/l.
  • Měření lze provést při vlnové délce 500 nm a 546 nm. Maximální přípustná absorbance činidla, naměřená při 546 nm proti vodě, je 0,3.
Bezpečnostní charakteristiky:
Určeno pro in vitro diagnostické použití oprávněnou a odborně způsobilou osobou. Činidlo R1 obsahuje 0,74% žíravého hydroxidu sodného a je klasifikováno jako dráždivé a také obsahuje méně než 0,1% azidu sodného, který je klasifikován jako velmi toxický a nebezpečný pro životní prostředí.
Standardní věta o nebezpečnosti:
H315 Dráždí kůži.
H319 Způsobuje vážné podráždění očí.
Pokyny pro bezpečné zacházení:
P280 Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv/ochranné brýle.
P302+P352 PŘI STYKU S KŮŽÍ: Omyjte velkým množstvím vody.
P305+P351+P338 PŘI ZASAŽENÍ OČÍ: Několik minut opatrně vyplachujte vodou. Vyjměte kontaktní čočky, jsou-li nasazeny, a pokud je lze vyjmout snadno. Pokračujte ve vyplachování.
První pomoc:
Při potřísnění důkladně omýt pokožku vodou. Při zasažení očí otevřené oko co nejrychleji proplachovat cca 15 minut proudem vody, postiženého dopravit k odbornému lékaři. Při náhodném požití vypláchnout ústa vodou, vypít asi 0,5 l vlažné vody a vyhledat lékařskou pomoc.