Stanovení je založeno na kultivaci fekálních enterokoků na povrchu pevné selektivní půdy obsahující k potlačení růstu gramnegativních bakterií azid sodný a TTC, který je redukován na červený formazan, který způsobuje typické zabarvení kolonií fekálních streptokoků. Vyrostlé kolonie jsou pak podrobeny konfirmaci.

Stanovený objem tekutého vzorku, výchozí suspenze, nebo vhodného ředění se očkuje přelivem selektivně-diagnostickou živnou půdou v Petriho miskách. Pro stanovení enterokoků se běžně používá živná půda SBA (Slanetz-Bartley agar). Naočkované plotny se kultivují aerobně při 37 °C po dobu 24 – 48 hodin.

Zkoušený vzorek asepticky otevřeme a připravíme příslušný počet ředění, který vychází z předpokládaného počtu mikroorganismů. Tekutý vzorek a příslušná desetinásobná ředění očkujeme přelivem, a to vždy novou sterilní pipetou po 1 ml souběžně do dvou sterilních řádně označených Petriho misek. Inokulum v každé Petriho misce přelijeme asi 15 ml SBA agaru vytemperovaného na (45 ±2) °C, důkladně krouživým pohybem promícháme a necháme utuhnout na chladné vodorovné ploše. Přičemž doba od ukončení přípravy výchozí suspenze a přelití inokula živnou půdou v miskách nesmí překročit 15 minut. Po ztuhnutí agarové půdy Petriho misky obrátíme dnem vzhůru a kultivujeme aerobně v termostatu při 37 °C po dobu 24 – 48 hodin.

Po skončení kultivace spočítáme typické kolonie vyrostlé na každé misce. První odečítání provádíme po 24 hodinách a výsledný počet narostlých kolonií se zjistí po ukončení kultivace, tj. po 48 hodinách. Pro výpočet použijeme misky obsahující 10 – 150 kolonií ze dvou po sobě následujících ředění. V případě potřeby další konfirmace se vybere 5 kolonií z každé misky a provedou se biochemické identifikační testy. Stanovený počet enterokoků vyjádříme jako počet KTJ v 1 ml nebo 1 g vzorku.

Po ukončení konfirmace dosahují kolonie velikosti v průměru 0,5 – 2 mm. Nejčastěji jsou lesklé, vypouklé, s hladkým okrajem s červenou až červenohnědou, kaštanovou barvou, můžou být i s růžovým středem.

Z každé misky se vybere 5 domnělých kolonií, které se podrobí konfirmaci. Konfirmace se provede pomocí hydrolýzy eskulinu a průkazu katalázy.

Kolonie se přeočkují na žluč-eskulin azidový agar a kultivují se při 44 °C 24 hodin. Za pozitivní se považují ty, které rostou v tmavě hnědých až černých drobných koloniích nebo zbarvují dvorec kultivační půdy černě.

Průkaz katalázy se provede katalázovým testem s 3% H₂O₂, kdy tvorba bublin kyslíku a šumění indikuje kataláza pozitivní mikroorganismy.

Kolonie s pozitivním žluč-eskulinovým a negativním katalázovým testem jsou považovány za fekální streptokoky.