3.4
Papírkové metody
Papírky pro stanovení inhibičních látek ve mléce jsou proužky filtračního kartonu rozdělené perforací na pracovní a manipulační část. Jsou uloženy jednotlivě v polyethylenových obálkách, které slouží současně jako kultivační obal. Používají se ve dvou typech A I a A II. Papírek typu A I obsahuje vysušenou živnou půdu, testovací kulturu Bacillus subtilis a indikátor TTC (2,3,5-trifenyltetrazolium chlorid). Typ A II kromě těchto složek obsahuje navíc enzym penicilinázu.
Pracovní postup:
Vzorek mléka se inaktivuje v široké zkumavce při 85 °C 5 minut a vytemperuje se na 37 °C. Pak se postupně do vzorku ponoří papírky A I a II, každý na 3 s. Po vyjmutí se přebytečné mléko nechá stéci po vnitřní stěně zkumavky. Papírky se vloží nazpět do původních polyethylenových obálek, které se zataví. Inkubují se při 37 °C 12 až 15 hodin.
Hodnocení:
Po nasátí vzorku se v testovacím papírku rozpustí živiny, testovací kultura se začne rozmnožovat a redukuje přítomný TTC. Z TTC vzniká červeně zbarvený formazán. Papírek zrůžoví nebo zčervená. Jestliže vzorek obsahuje antibiotika, nastane inhibice testovací kultury, nedochází k redukci TTC a zbarvení testu se nezmění. Současným vyšetřením vzorku papírkem A I i A II lze rozlišit, zda inhibiční látka je penicilin nebo jiná sloučenina.
Hodnocení: Testová kultura tvoří nepravé růžové kolonie.
Tabulka 9. Hodnocení papírkové metody
A1
A2
Růst kultury
Přítomnost inhibičních látek
růžové
růžové
testová kultura roste
inhibiční látky nepřítomny
bílé
růžové
testová kultura roste po rozložení penicilinu
inhibiční látky přítomny
bílé
bílé
testová kultura neroste
inhibiční látky přítomny – jiné než penicilin
Papírková metoda je velmi jednoduchá, papírky jsou pohotově kdykoliv k použití. Nevýhodou je příliš dlouhá doba kultivace.
+
15. Antibiotesty
Obr. 15. Antibiotesty
+
16. Antibiotestový papírek
Obr. 16. Antibiotestový papírek
Příklad
Úkol:
Rozhodněte, zda vzorky mléka obsahují inhibiční látky.
Použijte metody:
Difúzní test – plotnová metoda (disková)
+
17. Vyhodnocení plotnové metody
Obr. 17. Vyhodnocení plotnové metody
Mikrometoda – Delvotest
Papírková metoda – antibiotest
Metody na principu chemické reakce (β-star)
Vždy použijte jako kontrolní mléko bez inhibičních látek K1 a se známou koncentrací známé inhibiční látky K2.
Video 1. Metody kontroly syrového mléka
CPM se u syrového mléka stanovuje jako
Kultivace při stanovení CPM je
Somatické buňky jsou
Počet somatických buněk v syrovém mléce je
Mastitis test NK je založen
Tester mastitidy 4QMast měří
Jako testovací kultura pro stanovení přítomnosti inhibičních látek se používá
Metoda Delvotest se používá ke stanovení
Inhibiční látky ve mléce
Difúzní test – plotnová metoda (disková) se používá ke stanovení