Nepřímými metodami se neregistrují jednotlivé buňky, ale odhaduje se jejich obsah podle druhotných projevů.

Jedná se o jednoduchou orientační zkoušku, při níž se na zdravotní stav dojnice usuzuje podle množství sedimentu po centrifugaci vzorku mléka. Mléko nemocných dojnic obsahuje 0,1 až 0,2 % sedimentu. Ke zkoušce je zapotřebí speciálních odstředivkových zkumavek protažených v kalibrovanou kapiláru.

Je určen ke zkoušení mléka z jednotlivých čtvrtí vemene při vyhledávání mastitid. Test je založen na změnách viskozity, které nastanou při smíchání vzorku se stejným množstvím činidla. Účinkem laurylsulfátu sodného, který je součástí činidla, dochází k polymeraci DNA z buněčných jader leukocytů. V činidle je také přítomen indikátor pH. Konzistence a zbarvení se posuzuje při promíchání směsi v testovací paletě. Hodnotí se zrakem postřehnutelné změny podle hodnotící tabulky.

Roztok pro NK test: roztok detergentu v destilované vodě, obarvený fenolovou červení. Používá se k vyhledávání dojnic podezřelých z onemocnění mléčné žlázy jako rychlá stájová zkouška.

Reagens dává pozitivní reakce po smísení s mlékem se zmnoženými somatickými buňkami (především jadernými) a se změnou aktuální reakce (pH). K těmto změnám v mléce dochází zpravidla při podráždění parenchymu mléčné žlázy bakteriálními i nebakteriálními vlivy. Po smísení přípravku s mlékem se zvýšeným obsahem jaderných somatických buněk dochází ke změně konzistence ve formě různě viskózního gelu. Při současné změně pH mléka dochází k barevné změně směsi. Žluté zbarvení svědčí pro reakci kyselou, červené pro zásaditou.

Na miskách palety se asi 2 ml mléka smísí se 2 ml testovacího roztoku a při naklánění palety se posuzuje reakce, která nastupuje zpravidla do 30 sekund.

Pozitivní reakce se projeví různě výraznou tvorbou vloček, vláken až gelu. Při silně pozitivních reakcích se po ustání směsi gel stahuje do středu misky. Současně dochází k barevné reakci působením rozdílného pH na barevný indikátor. Od množství 200 000 somatických buněk v 1 ml dochází k pozitivní reakci.

Pozn. Mléko na začátku laktačního období (do 3 – 5 i více dní) a krátce před zaprahnutím může vykázat pozitivní reakce i u zdravých krav. Stejné ovlivnění reakce může nastat i při náhlých změnách krmiva apod. V těchto případech jsou zpravidla reakce ve všech 4 čtvrtích stejné intenzity.

Je určen pro kontrolu bazénových vzorků. Podstata stanovení je stejná jako u mastitis testu NK. Činidlo neobsahuje indikátor, protože ve směsném mléce je zjišťování reakce bezpředmětné. Stanovení se dělá v Petriho miskách.

Testovací roztok je roztok detergentu v destilované vodě. Jedná se o průhledný, mírně opaleskující roztok, který po protřepání silně pění. Mírné zbarvení do žlutohněda je dáno barvou detergentu.

Jedná se o diagnostický přípravek k nepřímému stanovení množství somatických buněk ve směsných vzorcích mléka dojnic.

Vzorky se odebírají před svozem mléka na farmě z každé nádoby či nádrže jednotlivě. Před odběrem je nutné provést důkladné promíchání mléka. Použití konzervačních prostředků je nepřípustné. Z odebraných vzorků je možné poměrným mísením připravit průměrný vzorek pro jednu stáj.

Vzorek se vytemperuje na 20 °C. Na Petriho misku se napipetují 2 ml vzorku a 2 ml testu. Krouživým pohybem se obě tekutiny okamžitě smíchají a současně se sleduje reakce. Hodnocení reakce se provádí proti tmavému pozadí v šikmo procházejícím světle za současného naklánění misky. Sleduje se charakter filmu na dně misky (viskozita, vlákna, shluky).

Tento test se v současné době používá jen omezeně.

Hodnocení: Pro dobré mléko je mezní hodnota 400 000 leukocytů v 1 ml mléka. Tomuto požadavku odpovídají stupně 0 až 2. Stupeň pozitivity 3 až 4 je typický pro mastitidní mléka a mléka porušená vlivem sekrečních poruch mléčné žlázy.

Tato zkouška je založena na změnách viskozity po promíchání vzorku se stejným množstvím činidla. Tyto změny se hodnotí podle rychlosti, s jakou vytéká směs z kalibrované trubice. Čím více je ve vzorku somatických buněk, tím je větší viskozita a vytékání pomalejší. Měří se výška sloupce roztoku zbývajícího v kalibrované trubici po uplynutí stanovované doby (15 s) vytékání. Hodnocení je objektivnější než NT a NKT.

Vyhledávací test pro individuální vzorky. Na testovací papírek se odstříkne vzorek mléka z každého struku a nechá se působit. Změna barvy (Bromthymolová modř) test vyznačeného bodu signalizuje zánět vemene. Čtyři kroužky napuštěné speciální látkou jsou na papírku vyznačené dle jednotlivých čtvrtin vemene. Hodnocení: světle zelená – dobré mléko, tmavě zelená – mléko od nemocné dojnice. Dojnice v pozdější laktaci může dávat falešně pozitivní reakci!

Tester mastitidy 4QMast indikátor pro všechny čtvrtiny vemene. Přístroj měří elektrický odpor mléka z jednotlivých čtvrtin vemene. Mastitida (zánět vemene) je spojena s velkým nárůstem soli v mléce (Na⁺, Cl^-, atd.). 4QMast detekuje tyto změny dlouho předtím, než je možné u zvířete pozorovat klinické symptomy a příznaky. Pomocí rychlotestu lze spolehlivě diagnostikovat subklinickou mastitidu. Výsledky měření u všech čtvrtin vemene se zobrazují současně.

Podstatou je zjištění, že DNA, uvolněná z buněk a despiralizovaná, tvoří s detergenty viskózní směs. Viskozita je v pozitivní korelaci s počtem somatických buněk.

Do testovací palety se odměří 2 ml mléka a smíchá se s 2 ml činidla, promíchá se. Hodnotí se intenzita změn – viskozita a odkapávání.

Výsledků testu:

DNA uvolněná ze somatických buněk tvoří s detergenty viskózní reakční směs. První střiky na diagnostické paletě se smísí ve stejném množství s reagens, které obsahuje detergent a indikátor změny pH. Hodnocení se provádí zařazením do pěti stupňů dle viskozity a současně se posuzuje barva směsi.

Je založený na změně pH mléka. Do 3 ml mléka se přidají 2 až 3 kapky 0,9% purpurového roztoku bromokrezolu. Normální mléko po přidání roztoku je žluté, zatímco mastitidní mléko je modré nebo fialové.

Kataláza je enzym obsažený zejména v jaderných buňkách. U nemocné dojnice se zvyšuje počet somatických buněk. Vysoký obsah somatických buněk je i v mlezivu a starodojném mléce (nespecificky vzniká vyšší obsah přítomností mikroorganizmů). Průkazem přítomnosti katalázy je silné pěnění mléka, způsobené kyslíkem, který vzniká rozkladem přidaného peroxidu vodíku.

Vzorek mléka se napipetuje do tří čtvrtin objemu zkumavky, přidají se tři kapky 3% H₂O₂ a zkumavka se uzavře zátkou a promíchá. Po uvolnění zátky dochází u mléka s vysokým počtem somatických buněk pěnění až vzkypění.

Podstatou stanovení je vznik vloček v reakční směsi mastitidního mléka s roztokem NaOH. Ve zkumavce se smísí 10 ml mléka a 2 ml 4% roztoku hydroxidu sodného, pozoruje se změna konzistence.

Metoda využívá korelace mezi počtem somatických buněk a množstvím DNA uvolněným po rozkladu buněk. Ke stanovení je využita difenylaminová reakce a spektrometrické stanovení.

Při zánětu mléčné žlázy se zvyšuje průchodnost hematoalveolární bariéry a z krve pronikají do mléka i vysokomolekulární látky včetně sérumalbuminu. Stanovení je založeno na radiální difúzi v agarovém gelu obsahujícím specifické protilátky proti bovinnímu sérumalbuminu, vyhodnocení je provedeno na základě stanovení průměru precipitační zóny.

Polymorfonukleáry migrující během zánětu do mléčné žlázy uvolňují proteolytické enzymy, které napadají tkáně mléčné žlázy. Mastitidní sekret však obsahuje i inhibitory těchto proteáz. Aktivita inhibitorů je v pozitivní korelaci s počtem somatických buněk. Vzorky se čistí koprecipitací a odstředěním, k supernatantu se přidá trypsin a substrát, po inkubaci se měří na fotometru absorbance chromogenu uvolněného trypsinem.

Zánětlivé sekrety mléčné žlázy obsahují enzym N-acetyl-beta-D-glukozaminidázu z rozpadlých polymorfonukleárů a hlavně epiteliálních buněk. Vzorky mléka se smíchají se substrátem a v kyselém prostředí se inkubují. Po hydrolýze se ze substrátu uvolní štěp, který se stane alkalizací fluorescentní. Reakce probíhá v mikrodestičkách, měří se fluorometrem.

Barva: bílá až nažloutlá, patologická změna barvy – červená: Dikumarolová toxicita, leptospiróza, stafylokokóza, zelená: Corynebacterium, žlutá: většina bakteriálních mastitid.

Vůně: – typická mléčná, fekální zápach: koliformní mastitida, acetonový zápach: ketóza.

Konzistence: Normálně mléčná konzistence, vodnaté mléko (snížení konzistence) – streptokoková mastitida, zvýšení konzistence – korynebakteriální mastitida.

Hodnocení se provádí ve speciálním hrnku se šikmým dnem.